细胞培养中的常见问题及解决方法1
1,悬浮细胞成簇:
可能原因:培养液中含钙 镁离子,支原体污染,蛋白酶过度消化细胞裂解,DNA污染。
解决方法:用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞,轻轻吹吸细胞获得细胞悬浮液,分离培养物,检测支原体。如发现支原体污染,丢弃培养物,用DNaseI处理细胞。
2培养细胞不贴壁
可能原因:胰蛋白酶消化过度,支原体污染,培养基PH过碱,细胞老化,接受细胞起始浓度太低或太高。
解决方法:
缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度;
分离培养物,检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物;
使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2;
启用新的保种细胞;
调节最佳接种细胞浓度。